Filho de emigrantes cubanos, em uma família católica. Em 1989, concluiu seus estudos no South Miami Senior High School. Posteriormente, cursou a Universidade da Flórida e a Universidade de Miami, onde obteve o título de advogado em 1993.
Sua carreira política começou em sua cidade natal, Miami, onde foi eleito em 1998 para a Comissão da Cidade de West Miami.
Em janeiro de 2000, foi eleito para a Câmara dos Representantes da Flórida e, entre 2007 e 2009, foi porta-voz do parlamento. Em 2010, chegou ao Senado dos Estados Unidos.
No ano de 2012, foi companheiro de campanha do candidato presidencial Mitt Romney.
Em abril de 2015, anunciou sua pré-candidatura às eleições presidenciais dos Estados Unidos de 2016. A comunicação oficial ocorreu na Freedom Tower, em Miami. Dessa forma, ele se tornava o terceiro candidato republicano e o primeiro de origem cubana.
Defensor fervoroso do modelo tradicional de família, demonstrou publicamente sua oposição ao casamento entre casais do mesmo sexo e ao aborto, bem como seu desacordo com a postura e a gestão de Obama em relação a Cuba.
DeSantis designará em janeiro o substituto de Marco Rubio no Senado da Flórida.
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